Biopolymers and cell. 2010; 26 (2): 115 - 120
Идентификация и функциональный анализ альтернативного промотора гена интерсектина 1 человека
С. В. Кропивко, Л. A. Циба, И. Я. Скрипкина, А. В. Рындич
Цель. Ген интерсектина 1 (ITSN1) кодирует эволюционно консервативный адаптерный белок, участвующий в клатрин-опосредованном эндоцитозе, внутриклеточной передаче сигнала, апоптозе и реорганизации цитоскелета. Его экспрессия характеризуется многочисленными событиями альтернативного сплайсинга. Дополнительным способом достижения разнообразия и тонкой регуляции экспрессии генов является использование альтернативных промоторов. Цель данной работы состояла в обнаружении возможных альтернативных промоторов гена ITSN1. Методы. Применены компьютерное предсказание, 5' RACE, RT-PCR и тест, основанный на анализе экспрессии репортерного гена. Результаты. Нами выявлен альтернативный промотор гена ITSN1 человека, локализованный в 5-м интроне, в результате использования которого образуются транскрипты с открытой рамкой считывания и консенсусной последовательностью Козак, способные кодировать изоформы ITSN1 без первого ЕН-домена. Показано, что участок, находящийся за 246–190 п. н. до начала 6-го экзона, необходим для функционирования альтернативного промотора. Транскрипты ITSN1, полученные с альтернативного промотора, обнаружены в тканях почек, печени, легких и мозга человека, но уровень их экспрессии значительно ниже по сравнению с основными изоформами ITSN1. Выводы. Полученные результаты свидетельствуют о том, что альтернативный промотор, локализованный в 5-м интроне гена ITSN1, функционирует как слабый промотор. Дальнейшие исследования необходимы для выяснения функции транскриптов ITSN1 с альтернативным 5'-концом.
Ключевые слова: интерсектин 1, альтернативный промотор, альтернативный сплайсинг, адаптерные белки, 5' UTR.