Biopolymers and Cell. 2011; 27(1): 53-58

ЭКСПРЕССИЯ И СЕКРЕЦИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО БЕЛКА LIF ЧЕЛОВЕКА ГЕНЕТИЧЕСКИ МОДИФИЦИРОВАННЫМИ КЛЕТКАМИ МЛЕКОПИТАЮЩИХ

Рымарь С. Е., Рубан Т. А., Иродов Д. М., Кордюм В. А.

Институт молекулярной биологии и генетики НАН Украины
ул. Академика Заболотного, 150, Киев, Украина, 03680

Цель работы состояла в получении экспрессии гена LIF человека в генетически модифицированных клетках млекопитающих и изучении секреции рекомбинантного белка этими клетками в культуральную среду. Методы. Для выявления рекомбинантного LIF в кондиционированной среде, полученной в результате культивирования клеток, трансфецированных рекомбинантными плазмидами, содержащими ген LIF, использовали Вестерн-блот-анализ и иммунопреципитацию. Результаты. Сконструированные рекомбинантные плазмиды обеспечивают експрессию и секрецию рекомбинантного LIF человека клетками трех линий (CHO-K1, L-M(TK–)(ins+) и 293Т), трансфецированными этими плазмидами. Степень гликозилирования продуцируемого такими клетками рекомбинантного LIF варьирует, при этом наблюдается секреция полностью гликозилированного LIF (с молекулярной массой около 68 кДа). Выводы. Кондиционированную среду, полученную вследствие культивирования трансфецированных клеток, можно использовать как источник LIF человека для культивирования клеток, нуждающихся в этом ростовом факторе, и для его выделения в чистом виде.

 
   
Ключевые слова: рекомбинантный LIF, экспрессия, секреция, трансфекция,клеточные линии.  

резюме на английском

резюме на украинском