Biopolymers and Cell 2012; 28(2) P 141-148

БІОАФФІННИЙ СОРБЕНТ НА ОСНОВІ ІММОБІЛІЗОВАНОГО БІЛКАА STAPHYLOCOCCUS AUREUS: СТВОРЕННЯ І ВИКОРИСТАННЯ

Горбатюк О. Б., 1Цапенко М. В., 1, 2Павлова М. В., 1, 2Окунєв О. В., 1, 2Кордюм В. А.

Київський національний університет імені Тараса Шевченко
вул. Володимирська, 64, Київ, Україна, 01033

1Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
вул. Академіка Заболотного, 150, Київ, Україна, 03680

2Інститут генетичесної і регенеративної медицини НАМН України
вул. Червоноармійська, 57/3, Київ , Україна, 03150

Мета. Створення біоафінного сорбента на основі орієнтовано іммобілізованого білка А Staphylococcus aureus (SPA) через два целюлозозв’язувальних домени (СBD) Clostridium thermocellum та його застосування для очищення антитіл. Методи. З використанням послідовностей ДНК, кодуючих SPA і два СBD, сконструйовано ген злитого білка SPA-CBD2 та забезпечено його отримання в розчинній формі експресією у клітинах Escherichia coli. Цільовий білок іммобілізовано методом біоафінного зв’язування на мікрокристалічній целюлозі. Результати. Встановлено такі характеристики біоафінного сорбента, як ємність (1 мг SPACBD2/1 мл целюлози), динамічна ємність (3 мг імуноглобулінів миші/1 мл сорбента) і продуктивність, а також показано його стабільність при тривалому зберіганні. За допомогою біоафінного сорбента виділено фракції імуноглобулінів з чистотою понад 95 %. Визначено, що очищені у такий спосіб антитіла з високою чутливістю виявляють відповідні антигени. Висновки. Запропонований біоафінний сорбент дозволяє отримувати очищені функціонально активні поліі моноклональні анттіла, а також проводити фракціонування на підкласи імуноглобулінів G миші.

Ключові слова: антитіла, білок А, целюлозозв’язувальний домен, іммобілізація білка, афінна хроматографія.

 

Summary in English
Резюме на русском