Biopolym. Cell. 2015; 31(4):279-284.
Молекулярная и клеточная биотехнологии
Создание хроматографического сорбента основанного на иммобилизированных одноцепочечных антителах для аффинного выделения рекомбинантного IFN-β1b человека
1, 2Похоленко Я. А., 1, 2Горбатюк О. Б., 1, 2Окунєв О. В., 1, 2Иродов Д. М., 1Дегтярева М. И., 1, 2Паливода О. Г., 1, 2Кордюм В. А.
  1. Институт молекулярной биологии и генетики НАН Украины
    ул. Академика Заболотного, 150, Киев, Украина, 03680
  2. Государственное учреждение «Институт генетической и регенеративной медицины НАМН Украины»
    ул. Вышгородская, 67, Киев, Украина, 04114

Abstract

Цель. Разработать лабораторный метод создания иммуноаффинного хроматографического сорбента для выделения и очистки рекомбинантного IFN-β1b человека. Методы. Ис­по­льзуя последовательности ДНК, кодирующие ScFv специ­фичные к hIFN-β1b, и целлюлозосвязывающий домен (CBD) Clostridium thermocellum, создан ген химерного белка ScFvbINF-CBD. Проведена экспрессия созданного химерного белка в клетках Escherichia coli. Целевой белок получали в растворимой, функционально активной форме путем ренатурации из бактериальных телец включения in vitro. ScFvbINF-CBD иммобилизовали на хитиновом носителе. Результаты. Вве­дение CBD в состав химерного белка обеспечивает ориентированную не ковалентную иммобилизацию ScFvbINF-CBD на хроматографической матрице. С помощью созданного иммуносорбента был выделен rhIFN-β1b из сложной смеси белков, полученной после его ренатурации из телец включения, с чистотой более 89 %. Вы­воды. Созданный иммуноаффинный хроматографический сорбент позволяет выделять рекомбинатный IFN-β1b человека из сложных белковых смесей.
Keywords: интерферон-β1b, одноцепочечные ан­титела, иммуноаффинная очистка, целлюлозосвязывающий домен.

References

[1] Blank K, Lindner P, Diefenbach B, Plückthun A. Self-im­mobilizing recombinant antibody fragments for immunoaffinity chromatography: generic, parallel, and scalable protein purification. Protein Expr Purif. 2002;24(2):313–22.
[2] Berry MJ, Davies J, Smith CG, Smith I. Immobilization of Fv antibody fragments on porous silica and their utility in affinity chromatography. J Chromatogr. 1991;587(2):161-9.
[3] Compston A, Coles A. Multiple sclerosis. Lancet. 2008;372(9648):1502-17.
[4] Minagar A. Current and future therapies for multiple sclerosis. Scientifica (Cairo). 2013;2013:249101.
[5] Pavlova MV, Nikolaev IuS, Irodov DM, Okunev OV, Kordium VA, Gil'chuk PV. [Characterization of a panel of mouse single-chain antibodies against recombinant human interferon beta1b]. Tsitol Genet. 2008;42(4):3-11.
[6] Gilchuk PV, Okunev OV, Irodov DM, Pavlova MV, Yakovenko OYa. Immobilized single chain antibodies for affinity purification of recombinant human IFN-α2b. Biopolym Cell. 2006; 22(2):157–61.
[7] Studier FW. Protein production by auto-induction in high density shaking cultures. Protein Expr Purif. 2005;41(1):207-34.
[8] The Protein Protocols Handbook. Ed. Walker JM. Humana Press Inc. 2009 1984 p.
[9] Sambrook J, Fritsch EF, Maniatis T. Molecular cloning: A laboratory manual. New York: Cold Spring Harbor Lab. press, 1989.
[10] Morag E, Lapidot A, Govorko D, Lamed R, Wilchek M, Bayer EA, Shoham Y. Expression, purification, and characterization of the cellulose-binding domain of the scaffoldin subunit from the cellulosome of Clostridium thermocellum. Appl Environ Microbiol. 1995;61(5):1980-6.
[11] Bayer EA, Morag E, Lamed R. The cellulosome--a treasure-trove for biotechnology. Trends Biotechnol. 1994;12(9):379-86.
[12] Lehtiö J, Sugiyama J, Gustavsson M, Fransson L, Linder M, Teeri TT. The binding specificity and affinity determinants of family 1 and family 3 cellulose binding modules. Proc Natl Acad Sci U S A. 2003;100(2):484-9.
[13] Guo JQ, You SY, Li L, Zhang YZ, Huang JN, Zhang CY. Construction and high-level expression of a single-chain Fv antibody fragment specific for acidic isoferritin in Esche­richia coli. J Biotechnol. 2003;102(2):177–89.
[14] Tormo J, Lamed R, Chirino AJ, Morag E, Bayer EA, Shoham Y, Steitz TA. Crystal structure of a bacterial family-III cellulose-binding domain: a general mechanism for attachment to cellulose. EMBO J. 1996;15(21):5739-51.