Biopolym. Cell. 2001; 17(5):417-422.
http://dx.doi.org/10.7124/bc.0005CE
Структура та функції біополімерів
Характеристика епітопів М-вірусу картоплі з використанням синтетичних пептидів
1Вітер С. С., 1Ткаченко Т. Ю., 2Коломієць Л. П., 1Радавський Ю. Л.
  1. Інститут біоорганічної хімії та нафтохімії НАН України
    вул. Мурманська, 1, Київ, Україна, 02094
  2. Інститут сільськогосподарської мікробіології та агропромислового виробництва НААН
    вул. Шевченка, 97, Чернігів, Україна, 14027

Abstract

Після гідролізу білка оболонки (БО) українського штаму Vl M-вірусу картоплі (PVM) термолізином виділено фрагмент 29AADFEGK35 , який розпізнавався двома моноклональними антитілами (MKA) M6D5 та M9G1, специфічними до PVM. Цей гептапептцд є С-кіщевою частиною триптичного тетрадекапептиду 22EARPLPTAADFEGK35 (П14), який розпізнавався тими самими MKA. Для визначення внеску негативно заряджених дикарбонових амінокислот у формування комплексу антиген–антитіло синтезовано синтетичні пептиди, що повторюють послідовності триптичного (П14) та термолізинового (П7) фрагментів, а дгакож гептапептиди, які містили заміни Asp31 та Glu33 на аланін. Усі синтетичні гептапептиди слабко взаємодіяли з обома MKA в непрямому ІФА. Ці пептиди використовували як інгібітори взаємодії MKA-БО і МКА-П14. Результати інгібування ІФА показали, що: 1) однакові концентрації пептидів ефективніше інгибують взаємодію MKA з П14, ніж із БО; 2) заміна заряджених амінокислот, особливо заміна Asp31 , значно зменшує здатність пептидів пригнічувати взаємодію антиген–антитіло; 3) гептапептиди, що містять заміни амінокислот на аланін, ефективніше пригнічують взаємодію MKA M6D5 з антигенами та набагато слабше інгібують реакщір MKA M9G1 з тими самими антигенами. Таким чином, Asp31 та Glu33 по-різному впливають на формування комплексу антиген–антитіло.
Повний текст: (PDF, англійською)

References

[1] Viter SS, Tkachenko TYu, Kolomietz LP, Radavsky YuL. Analysis of antigenic structure of Potato Virus M Ukrainian strains. Biopolym Cell. 2000; 16(4):312-9.
[2] Nikolayeva OV, Novikov VK, Atabekov IG, Kaftanova AS. Changes in the antigenic properties of the potato virus M with progressive degradation of structural protein during isolation and storage. Sel'skokhozyaystvennaya biologiya. 1985; 10:75-8.
[3] Tavantzis SM. Physicochemical properties of potato virus M. Virology. 1984;133(2):427-30.
[4] Laemmli UK. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 1970;227(5259):680-5.
[5] Wu GJ, Bruening G. Two proteins from cowpea mosaic virus. Virology. 1971;46(3):596-612.
[6] Lowry OH, Rosebrough NJ, Farr AL, Randall RJ. Protein measurement with the Folin phenol reagent. J Biol Chem. 1951;193(1):265-75.
[7] Barany G, Merrifield RB. Solid-phase peptide synthesis. Peptides. Eds E. Gross, J. Meienhoter. New York: Acad, press, 1980. Vol. 2: 1-284.
[8] J?rvek?lg L, S?ber J, Sinij?rv R, Toots I, Saarma M. Time-resolved fluoroimmunoassay of potato virus M with monoclonal antibodies. Ann Appl Biol. 1989;114(2):279-91.
[9] Zavriev SK, Kanyuka KV, Levay KE. The genome organization of potato virus M RNA. J Gen Virol. 1991;72 ( Pt 1):9-14.
[10] Muller S, Plaue S, Couppez M, Van Regenmortel MH. Comparison of different methods for localizing antigenic regions in histone H2A. Mol Immunol. 1986;23(6):593-601.
[11] Joisson C, Kuster F, Plau? S, Van Regenmortel MH. Antigenic analysis of bean pod mottle virus using linear and cyclized synthetic peptides. Arch Virol. 1993;128(3-4):299-317.
[12] Rajashankar KR, Ramakumar S. Pi-turns in proteins and peptides: Classification, conformation, occurrence, hydration and sequence. Protein Sci. 1996;5(5):932-46.
[13] Benjamin DC, Berzofsky JA, East IJ, Gurd FR, Hannum C, Leach SJ, Margoliash E, Michael JG, Miller A, Prager EM, et al. The antigenic structure of proteins: a reappraisal. Annu Rev Immunol. 1984;2:67-101.
[14] Al Moudallal Z, Briand JP, Van Regenmortel MH. Monoclonal antibodies as probes of the antigenic structure of tobacco mosaic virus. EMBO J. 1982;1(8):1005-10.
[15] Blondel B, Crainic R, Fichot O, Dufraisse G, Candrea A, Diamond D, Girard M, Horaud F. Mutations conferring resistance to neutralization with monoclonal antibodies in type 1 poliovirus can be located outside or inside the antibody-binding site. J Virol. 1986;57(1):81-90.
[16] Collawn JF, Wallace CJ, Proudfoot AE, Paterson Y. Monoclonal antibodies as probes of conformational changes in protein-engineered cytochrome c. J Biol Chem. 1988;263(18):8625-34.