Biopolym. Cell. 2010; 26(6):512-516.
http://dx.doi.org/10.7124/bc.00017C
Короткі повідомлення
Нові антитіла проти RCD-8 як інструмент для вивчення процесивних тілець
1, 2Гудкова Д. О., 1Панасюк Г. Г., 1Немазаний І. О., 1Філоненко В. В.
  1. Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
    Вул. Академіка Заболотного, 150, Київ, Україна, 03680
  2. Київський національний університет імені Тараса Шевченка
    вул. Володимирська 64, Київ, Україна, 01601

Abstract

Мета. Розробити модельну систему для вивчення стану процесивних тілець як можливого показника активності mTOR-кінази в клітинах ссавців. Методи. Виділено поліклональні антитіла до одного з основних білків процесивних тілець – RCD-8 із застосуванням методу імуноцитохімії. Результати. Показано, що отримані антитіла розпізнають внутрішньоклітинні структури, надалі ідентифіковані як процесивні тільця. Білок, що детектується антитілами, локалізується разом з відомим маркером процесивних тілець (DCP1a) та частково – з маркером стресових гранул (CPEB). Висновки. На основі даних щодо зміни розмірів і кількості процесивних тілець у відповідь на обробку клітин відомими індукторами та інгібіторами утворення процесивних тілець доведено специфічність зазначених антитіл і підтверджено можливість їхнього використання для дослідження динаміки утворення процесивних тілець під контролем mTOR-залежного сигнального шляху.
Keywords: процесинг мРНК, декепінг, процесивні тільця, імуноцитохімія
Повний текст: (PDF, англійською)

References

[1] Coller J., Parker R. Eukaryotic mRNA decapping Annu. Rev. Biochem 2004 73:861–890.
[2] Cougot N., van Dijk E., Babajko S., Seraphin B. «Cap-tabolism» Trends Biochem. Sci 2004 29, N 8:436–444.
[3] Buchan J.R, Parker R. Eukaryotic stress granules: the ins and outs of translation Mol. Cell 2009 36, N 6:932–941.
[4] Wilusz C., Wormington M., Peltz S. The cap-to-tail guide to mRNA turnover Nat. Revs Mol. Cell Biol 2001 2, N 4:237–246.
[5] Averous J., Proud C. G. When translation meets transformation: the mTOR story Oncogene 2006 25, N 48:6423– 6435.
[6] Liu L., Li F., Cardelli J. A., Martin K. A., Blenis J., Huang S. Rapamycin inhibits cell motility by suppression of mTORmediated S6K1 and 4E-BP pathways Oncogene 2006 25, N 53:7029–7070.
[7] Sun S., Rosenberg L. M., Wang X., Zhou Z., Yue P., Fu H., Khuri F. R. Activation of akt and eIF4E survival pathways by rapamycin-mediated mammalian target of rapamycin inhibition Cancer Res 2005 65, N 16:7052–7058.
[8] Stinton L. M., Eystathioy T., Selak S., Chan E. K., Fritzler M. J. Autoantibodies to protein transport and messenger RNA processing pathways: endosomes, lysosomes, Golgi complex, proteasomes, assemblyosomes, exosomes, and GW bodies Clin. Immunol 2004 110, N 1:30–44.
[9] Parker R., Sheth U. P bodies and the control of mRNA translation and degradation Mol. Cell 2007 25, N 5:635–646.
[10] Garcia-Lozano J. R., Gonzales-Escribano M. F., Wichmann I., Nunez-Roldan A. Cytoplasmic detection of a novel protein containing a nuclear localization sequence by human autoantibodies Clin. Exp. Immunol 1997 107, N 3:501–506.
[11] Yu J. H., Yang W.-H., Gulich T., Bloch K. D., Bloch D. Ge-1 is a central component of the mammalian cytoplasmic mRNA processing body RNA 2005 11, N 12:1795–1802.
[12] Bloch D. B., Gulick T., Bloch K. D., Yang W.-H. Processing body autoantibodies reconsidered RNA 2006 12, N 5:707–709.
[13] Fenger-Gron M., Fillman C., Norrild B., Lykke-Andersen J. Multiple processing body factors and the ARE binding protein TTP activate mRNA decapping Mol. Cell 2005 20, N 6:905–915.
[14] Nemazanyy I., Breus O., Gout I., Filonenko V., Panasyuk G. Generation and characterization of monoclonal antibodies to mTOR kinase Hybridoma 2008 27, N 5:395–399.
[15] Wilczynska A., Aigueperse C., Kress M., Dautry F., Weil D. The translational regulator CPEB1 provides a link between dcp1 bodies and stress granules J. Cell Sci 2005 118, N 5:981–992.
[16] Mollet S., Cougot N., Wilczynska A., Dautry F., Kress M., Bertrand E., Weil D. Translationally repressed mRNA transiently cycles through stress granules during stress Mol. Biol. Cell 2008 19, N 10:4469–4479.
[17] Cavigelli M., Li W., Lin A., Su B., Yoshioka K., Karin M. The tumor promoter arsenite stimulates AP-1 activity by inhibiting a JNK phosphatase The EMBO J 1996 15, N 22:6269–6279.