Biopolym. Cell. 2015; 31(5):345-350.
Структура та функції біополімерів
Ензиматична активність плазміну в присутності актину
1Юсова О. І.
  1. Інститут біохімії ім. О. В. Палладіна НАН України
    вул. Леонтовича, 9, Київ, Україна, 01601

Abstract

Мета. Дослідити зміну активності плазміну по відношенню до високо- та низькомолекулярних субстратів за присутності актину. Методи. Протеїни, які використовувались в роботі, отримували афінною хроматографією, гель-фільтрацією та електрофорезом. Ензиматичну активність плазміну досліджували турбідіметрією та методом визначення активності з використанням хромогенного субстрату. Для вивчення взаємодії між плазміногеном та його фрагментами і актином використовували принцип імуноферментного аналізу та авідин-біотинову реакцію. Результати. Показано, що G-актин знижує в 1,5 рази швидкість гідролізу полімерного фібрину плазміном і Glu-плазміногеном, активованим тканинним активатором. Разом з тим, актин не запобігає автолізу плазміну і не впливає на його амідазну активність. Досліджено взаємодію біотинільованих Glu-плазміногену та його фрагментів – кринглу1-3, кринглу 4 та міні-плазміногену з імобілізованим G-актином. Показано, що Glu-плазміноген і крингл 1-3 виявляють високу спорідненість до актину (C50 113 і 117 нМ відповідно). Міні-плазміноген та крингл 4 з актином не зв’язуються. Однакова спорідненість Glu-плазміногену і крингла 1-3 до актину свідчать про участь лізин-зв’язувальних ділянок крингла 1-3 нативної форми плазміногену у взаємодії з актином. Висновки. Актин може модулювати специфічність дії плазміну по відношенню до високомолекулярних субстратів шляхом його взаємодії з лізин-зв’язувальними ділянками кринглових доменів ензима. Пригнічення актином фібринолітичної активності плазміна обумовлене його конкуренцією з фібрином за лізин-зв’язувальні сайти плазміногену/плазміну.
Keywords: плазмін, актин, фрагменти плазміногену, ензиматична активність плазміну.

References

[1] Syrovets T, Lunov O, Simmet T. Plasmin as a proinflammatory cell activator. J Leukoc Biol. 2012;92(3):509-19.
[2] Marcum JA, Kline DL. Species specificity of streptokinase. Comp Biochem Physiol B. 1983;75(3):389-94.
[3] Wohl RC, Sinio L, Summaria L, Robbins KC. Comparative activation kinetics of mammalian plasminogens. Biochim Biophys Acta. 1983;745(1):20-31.
[4] Castellino FJ, Sodetz JM, Brockway WJ, Siefring GE Jr. Streptokinase. Methods Enzymol. 1976;45:244-57.
[5] Cederholm-Williams SA, De Cock F, Lijnen HR, Collen D. Kinetics of the reactions between streptokinase, plasmin and alpha 2-antiplasmin. Eur J Biochem. 1979;100(1):125-32.
[6] Wang H, Schultz R, Hong J, Cundiff DL, Jiang K, Soff GA. Cell surface-dependent generation of angiostatin4.5. Cancer Res. 2004;64(1):162-8.
[7] Mejean C, Roustan C, Benyamin Y. Anti-actin antibodies. Detection and quantitation of total and skeletal muscle actin in human plasma using a competitive ELISA. J Immunol Methods. 1987;99(1):129-35.
[8] Deutsch DG, Mertz ET. Plasminogen: purification from human plasma by affinity chromatography. Science. 1970;170(3962):1095-6.
[9] Sottrup-Jensen L, Claeys H, Zajdel M, Petersen TE, Magnusson S. The primary structure of human plasminogen: isolation of two lysine-binding fragment and one “mini-plasminogen” (M.W. 38000) by elastase catalyzed specific limited proteolysis In: Progress in chemical fibrinolysis and thrombolysis. Eds VF Davidson, Rowan RH, Samama MM, Desnoyers DC. Raven Press, New-York. 1977;3:191–9,
[10] Pozdnjakova TM, Musjalkovskaja AA, Ugarova TP, Protvin DD, Kotsjuruba VN. On the properties of fibrin monomer prepared from fibrin clot with acetic acid. Thromb Res. 1979;16(1-2):283-8.
[11] Bouvier SA, Beretta-Piccoli M, Giacometti N. Light scattering measurements of polymerization and depolimerization of fibrin: a tool for studing coagulation and fibrinolysis. Progress in chemical fibrinolysis and thrombolysis. Eds. Davidson JF et al. N.Y. Raven Press 1975;1:281–88.
[12] Gitlin G, Bayer EA, Wilchek M. Studies on the biotin-binding site of avidin. Lysine residues involved in the active site. Biochem J. 1987;242(3):923-6.
[13] Violand BN, Castellino FJ. Mechanism of the urokinase-catalyzed activation of human plasminogen. J Biol Chem. 1976;251(13):3906-12.
[14] Laemmli UK. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 1970;227(5259):680-5.
[15] Robbins KC, Summaria L, Hsieh B, Shah RJ. The peptide chains of human plasmin. Mechanism of activation of human plasminogen to plasmin. J Biol Chem. 1967;242(10):2333-42.
[16] Hoylaerts M, Rijken DC, Lijnen HR, Collen D. Kinetics of the activation of plasminogen by human tissue plasminogen activator. Role of fibrin. J Biol Chem. 1982;257(6):2912-9.
[17] Stack S, Gonzalez-Gronow M, Pizzo SV. Regulation of plasminogen activation by components of the extracellular matrix. Biochemistry. 1990;29(20):4966-70.
[18] Zhernosekov DD, Iusova EI, Grinenko TV. [Role of plasminogen/plasmin in functional activity of blood cells]. Ukr Biokhim Zh (1999). 2012;84(4):5-19.
[19] Tykhomyrov AA. Interaction of actin with plasminogen. plasmin system: mechanisms and physiological role. Biopolym Cell. 2012; 28(6):413–23.
[20] Lind SE, Smith CJ. Actin accelerates plasmin generation by tissue plasminogen activator. J Biol Chem. 1991;266(26):17673-8.