Biopolym. Cell. 2002; 18(2):102-109.
 Використання дріжджової двогібридної системи 
для пошуку S6K1 та S6K2 зв'язуючих партнерів
- Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
 Вул. Академіка Заболотного, 150, Київ, Україна, 03680
- Людвіговскій інститут дослідження раку, Лондонське відділення
 91, Райдінг Хауз стріт, Лондон, Велика Британія, WIP8BT
Abstract
Кіназа рибосомного білка S6 (S6K) задіяна в сигнальних механізмах регуляції проліферації, диференціації та клітинного росту. На сьогодні відомо дві форми S6K (S6K1 та 2), які мають цитоплазматичний та ядерний сплайсингові варіанти. Відомо лише декілька фізіологічних субстратів S6K і партнерів її білково-білкової взаємодії. Для пошуу нових партнерів взаємодії з 
S6K1 та 2 нами використано дріжджову двогібридну систему. За допомогою аналізу шести створених "bait"-конструктів виявлено, що тільки повнорозмірна форма S6K1 відповідала вимогам двогібридного скринінгу. Великомасштабний скринінг кДНКової бібліотеки ембріона миші дозволив нам виявити 26 позитивних клонів, 13 з яких підтверджено методом статевого 
злиття. Рестрикційні дослідження і аналіз послідовностей даних клонів показали, що всі вони містять кДНК розміром близько 4000 п. н. з однаковою картиною рестрикції та послідовностями на 5'- та 3'-кінцях. Порівняння отриманих послідовностей з геномными та білковими банками даних засвідчило, що кДНК одержаних клонів кодує фрагмент нового білка. Первинна структура даного білка та особливості його взаємодії з S6K знаходяться в процесі вивчення.
Повний текст:  (PDF, українською)
References
  [1]
  Phizicky EM, Fields S. Protein-protein interactions: methods for detection and analysis. Microbiol Rev. 1995;59(1):94-123.     
  [2]
  Gyuris J, Golemis E, Chertkov H, Brent R. Cdi1, a human G1 and S phase protein phosphatase that associates with Cdk2. Cell. 1993;75(4):791-803.    
  [3]
  Chien CT, Bartel PL, Sternglanz R, Fields S. The two-hybrid system: a method to identify and clone genes for proteins that interact with a protein of interest. Proc Natl Acad Sci U S A. 1991;88(21):9578-82.      
  [4]
  Vojtek AB, Hollenberg SM, Cooper JA. Mammalian Ras interacts directly with the serine/threonine kinase Raf. Cell. 1993;74(1):205-14.    
  [5]
  Wang T, Donahoe PK, Zervos AS. Specific interaction of type I receptors of the TGF-beta family with the immunophilin FKBP-12. Science. 1994;265(5172):674-6.    
  [6]
  Shih HM, Goldman PS, DeMaggio AJ, Hollenberg SM, Goodman RH, Hoekstra MF. A positive genetic selection for disrupting protein-protein interactions: identification of CREB mutations that prevent association with the coactivator CBP. Proc Natl Acad Sci U S A. 1996;93(24):13896-901.      
  [7]
  Dufner A, Thomas G. Ribosomal S6 kinase signaling and the control of translation. Exp Cell Res. 1999;253(1):100-9.    
  [8]
  Lane HA, Fernandez A, Lamb NJ, Thomas G. p70s6k function is essential for G1 progression. Nature. 1993;363(6425):170-2.    
  [9]
  Gout I, Minami T, Hara K, Tsujishita Y, Filonenko V, Waterfield MD, Yonezawa K. Molecular cloning and characterization of a novel p70 S6 kinase, p70 S6 kinase beta containing a proline-rich region. J Biol Chem. 1998;273(46):30061-4.    
  [10]
  Chou MM, Blenis J. The 70 kDa S6 kinase complexes with and is activated by the Rho family G proteins Cdc42 and Rac1. Cell. 1996;85(4):573-83.    
  [11]
  Peterson RT, Desai BN, Hardwick JS, Schreiber SL. Protein phosphatase 2A interacts with the 70-kDa S6 kinase and is activated by inhibition of FKBP12-rapamycinassociated protein. Proc Natl Acad Sci U S A. 1999;96(8):4438-42.      
  [12]
  Akimoto K, Nakaya M, Yamanaka T, Tanaka J, Matsuda S, Weng QP, Avruch J, Ohno S. Atypical protein kinase Clambda binds and regulates p70 S6 kinase. Biochem J. 1998;335 (Pt 2):417-24.    
  [13]
  Miller JH. Experiments in molecular genetics. Cold Spring Harbor Laboratory, 1972, 466 p.
  [14]
  Estojak J, Brent R, Golemis EA. Correlation of two-hybrid affinity data with in vitro measurements. Mol Cell Biol. 1995;15(10):5820-9.    
  [15]
  Berry DR. The Biology of Yeasts. Hodder & Stoughton Educational. 1982; 64 p.
