Жирова тканина є доступним і численним джерелом мезенхімальних стовбурових клітин (МСК) для регенеративної медицини, однак врожайність клітин і потенціал розширення значною мірою залежать від методу ізоляції, тоді як корисне вікно розширення обмежене старінням реплікації. Мета полягає в порівнянні механічної (експлант) та ферментативної ізоляції людського жиру, що виробляється MSC (AD-MSC), а також охарактеризувати кінетику росту ферментально ізольованих клітин під час послідовного розширення з проходом 7. Методи. AD-MSC були ізольовані з жирової тканини двома методами: механічним (експлант) та ферментативним розщепленням, а також відбором шляхом прикріплення до пластику. Клітини культивувалися в DMEM/F12 (1:1) з додаванням FBS і bFGF при 37 °C, 5% CO₂, у колбах площею 25/75/175 см², зі зміною середовища та пропуском злиття 70–90%. Кількість клітин і життєздатність вимірювалися в кожному проході за допомогою автоматичного лічильника (Countess, Invitrogen; trypan blue). За прохід розраховувалися подвоєння популяції (PD = log2(Nf/Ni)), кумулятивний PD (cPD) та час подвоєння (DT). Збільшені клітини були кріоконсервовані; стерильність підтверджувалася бактеріальною культурою та ПЛР-скринінгом. Результати. Механічна ізоляція експлантів не дала культури множення (лише окремі клітини, без росту). Ферментативна ізоляція утворила прихильні, веретеноподібні клітини, схожі на MSC, які рівномірно розширювалися протягом семи проходів протягом 52 днів. cPD збільшувався майже лінійно, досягнувши 27.7–P7. PD за прохід зріс з 2.4-3.0 (P1-P2) до піку 5.1-5.2 на P4-P5, потім знизився до 4.4 (P6) і 3.8 (P7); середній DT становив 1.8 дня (діапазон 1.2-2.9). Життєздатність залишалася високою протягом усього часу (77–94%, середнє ~87%). Тривале проліферацію з збереженою життєздатністю свідчить про активне самовідновлення, тоді як зниження кожного проходу PD на P6–P7 свідчить про раннє уповільнення реплікації. Клітини були успішно кріоконсервовані, а стерильність була підтверджена ПЛР-скринінгом як відсутність мікробного забруднення. Висновки. Ферментативна ізоляція значно перевершує механічний метод експлантації для відновлення AD-MSC і забезпечує відтворюване довгострокове розширення з високою життєздатністю та значним кумулятивним подвоєнням. Кількісні кінетичні параметри (PD, CPD, DT) встановлюють цільову основу для визначення вікна розширення перед старінням.