Мета. Гліобластома (GBM) — найпоширеніша пухлина мозку, яка здебільшого невиліковна через схильність до інвазії та стійкість до лікування. Агресивність GBM корелює з його високою гетерогенністю як у зв'язку з геномними змінами, так і стромальною архітектурою. У цьому дослідженні ми розглядаємо обидва аспекти гетерогенності GBM, поєднуючи вивчення гена CHI3L1 та його короткої транскриптомічної ізоформи CHI3L1-Δ8 за допомогою 3D-моделі клітинної культури (сфероїдів), що вважається більш характерною для пухлинної строми. Методи. Клітинні лінії: людський GBM U251 MG та його трансгенні похідні, що реекспресують такі мРНК: повнорозмірний CHI3L1 (U251-CHI3L1-FL); лише короткі ізоформи (видалення екзону 8) (U251-CHI3L1-Δ8); контрольний copGFP (U251-GFP). A) Утворення сфероїдів з клітин U251-GFP у мікроколодязі з низькою адгезією оцінювалося ICC із використанням антитіл до PCNA (проліферація) та Cas3 (апоптоз). З різними параметрами – щільність інокуляції (1K проти 5K клітин на мікробуровину) та час інкубації (48 годин; 72 год; 96 годин). B) Аналізуючи вищезазначені дані, для всіх клітинних ліній були обрані такі параметри формування сфероїдів: 5K-клітини та 72-годинна інкубація. Після формування сфероїди переносилися до матригелю, а інвазія контролювалася для наступного етапу протягом 48 годин. Результати. A) Порівняння щільності насіння та часу інкубації не виявило зсув PCNA або Cas3 у сфероїді U251-GFP, що свідчить про те, що ці фактори суттєво не впливали на проліферацію чи апоптоз. Це вплинуло на параметри інвазійного аналізу, дозволяючи інкубувати сфероїди з більшою щільністю (5K) протягом помірного часу (72 години), щоб досягти більшої кількості клітинно-клітинних взаємодій без шкоди для здоров'я клітин; B) Під час інвазії спостерігалася помітна різниця, залежна від ізоформ: сфероїди, що переекспресували CHI3L1-Δ8, мали рівень інвазії більш ніж у 2 рази повільніший, ніж у інших ліній (p < 0.05). Висновки. Сфероїди клітинної лінії GBM та її похідних були підготовлені з низькою адгезією мікроколодязів. Ключовим є те, що наші основні результати підтверджують попередні дані про відмінності ролей двох ізоформ CHI3L1 у прогресуванні GBM, при цьому клітини, що експресують CHI3L1-Δ8, мають здатність оглушувати інтрузию порівняно з іншими лініями, що узгоджується з даними, що видалення екзону 8 заважає ефективному секреціону білка CHI3L1, можливо, пригнічуючи міграцію та сигналізацію пропухлин. Гранти. Це дослідження було профінансовано Національним дослідницьким фондом України: грант 2023.03/0245